ในขอบเขตของการวิจัยทางชีววิทยาและการแพทย์สมัยใหม่ การวิเคราะห์การผสมพันธุ์ในแหล่งกำเนิด (ISH) ได้กลายเป็นเทคนิคที่มีประสิทธิภาพในการแสดงภาพและระบุลำดับกรดนิวคลีอิกเฉพาะภายในเซลล์หรือเนื้อเยื่อ Fluorescence in-situ hybridization (FISH) ซึ่งเป็นชนิดย่อยของ ISH ใช้โพรบฟลูออเรสเซนต์เพื่อจับกับลำดับกรดนิวคลีอิกเสริม ทำให้นักวิจัยสามารถตรวจจับและศึกษาความผิดปกติทางพันธุกรรม รูปแบบการแสดงออกของยีน และอื่นๆ อีกมากมาย ในฐานะซัพพลายเออร์ของเครื่องสแกน Fluorescence Slide ฉันมักถูกถามอยู่เสมอว่าเครื่องสแกนของเราสามารถนำมาใช้อย่างมีประสิทธิภาพสำหรับการวิเคราะห์ไฮบริดไดเซชันในแหล่งกำเนิดได้หรือไม่ ในบล็อกนี้ ฉันจะสำรวจคำถามนี้โดยละเอียด
ทำความเข้าใจการวิเคราะห์การผสมข้ามพันธุ์ในแหล่งกำเนิด
การวิเคราะห์ไฮบริไดเซชันในแหล่งกำเนิดเป็นกระบวนการที่มีหลายขั้นตอน ขั้นแรก ตัวอย่างเนื้อเยื่อจะถูกตรึงและซึมผ่านเพื่อให้โพรบสามารถเข้าไปได้ จากนั้น โพรบกรดนิวคลีอิกเฉพาะซึ่งมีป้ายกำกับว่าไอโซโทปกัมมันตภาพรังสี สีย้อมฟลูออเรสเซนต์ หรือเครื่องหมายอื่นๆ จะถูกเพิ่มเข้าไปในตัวอย่าง โพรบเหล่านี้ไฮบริไดซ์กับลำดับเสริมในกรดนิวคลีอิกเป้าหมาย หลังจากการไฮบริไดเซชัน โพรบที่ไม่ได้ผูกไว้จะถูกชะล้างออกไป และตัวอย่างจะถูกแสดงเป็นภาพ
โดยเฉพาะอย่างยิ่ง FISH มีข้อดีหลายประการ โดยให้ข้อมูลเชิงพื้นที่ที่มีความละเอียดสูงเกี่ยวกับตำแหน่งของลำดับกรดนิวคลีอิกภายในเซลล์และเนื้อเยื่อ สัญญาณฟลูออเรสเซนต์สามารถตรวจจับและวัดปริมาณได้อย่างง่ายดาย และสามารถใช้โพรบหลายตัวที่มีป้ายกำกับด้วยฟลูออโรฟอร์ที่แตกต่างกันได้พร้อมกันเพื่อตรวจจับลำดับเป้าหมายหลายลำดับ
บทบาทของเครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงในการวิเคราะห์ ISH
เครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงเป็นอุปกรณ์ที่จับภาพดิจิตอลความละเอียดสูงของสไลด์ที่มีป้ายกำกับเรืองแสง โดยจะใช้การผสมผสานระหว่างเลนส์ แหล่งกำเนิดแสง และเครื่องตรวจจับเพื่อสแกนพื้นที่สไลด์ทั้งหมด และสร้างสัญญาณดิจิทัลของสัญญาณฟลูออเรสเซนต์
ข้อดีของการใช้เครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงสำหรับ ISH
- การถ่ายภาพความเร็วสูง: ในการวิจัยและการตั้งค่าทางคลินิกจำนวนมาก จำเป็นต้องวิเคราะห์สไลด์จำนวนมาก เครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงสามารถสแกนหลายสไลด์ได้โดยอัตโนมัติ ซึ่งช่วยเพิ่มปริมาณงานได้อย่างมากเมื่อเทียบกับกล้องจุลทรรศน์แบบแมนนวล ตัวอย่างเช่น ในโครงการวิจัยมะเร็งที่จำเป็นต้องคัดกรองตัวอย่างเนื้อเยื่อหลายร้อยตัวอย่างเพื่อการจัดเรียงยีนใหม่โดยเฉพาะโดยใช้ FISH เครื่องสแกนสไลด์สามารถทำให้กระบวนการถ่ายภาพเสร็จสมบูรณ์ได้ภายในเสี้ยววินาทีของเวลาที่นักวิจัยใช้กล้องจุลทรรศน์เรืองแสงแบบดั้งเดิม
- คุณภาพของภาพที่สม่ำเสมอ: กล้องจุลทรรศน์แบบแมนนวลอาจมีความแปรปรวนในการรับภาพได้ เนื่องจากเทคนิคของผู้ปฏิบัติงานแตกต่างกัน เช่น การตั้งค่าการโฟกัสและการรับแสง ในทางกลับกัน เครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงได้รับการตั้งโปรแกรมให้ใช้พารามิเตอร์การถ่ายภาพที่สอดคล้องกันสำหรับแต่ละสไลด์ เพื่อให้มั่นใจว่าภาพที่ได้มามีคุณภาพสูงและสม่ำเสมอ นี่เป็นสิ่งสำคัญสำหรับการวิเคราะห์เชิงปริมาณที่แม่นยำของสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ใน ISH
- การเก็บถาวรและการวิเคราะห์ดิจิทัล: เมื่อสแกนสไลด์แล้ว ภาพดิจิทัลจะสามารถจัดเก็บ แบ่งปัน และวิเคราะห์ได้อย่างง่ายดายโดยใช้ซอฟต์แวร์พิเศษ ช่วยให้สามารถจัดเก็บข้อมูลในระยะยาวและช่วยให้สามารถวิจัยร่วมกันได้ เนื่องจากนักวิจัยหลายคนสามารถเข้าถึงและวิเคราะห์ภาพดิจิทัลเดียวกันได้จากระยะไกล ตัวอย่างเช่น กลุ่มวิจัยในส่วนหนึ่งของโลกสามารถแบ่งปันภาพ FISH ของตนกับผู้ทำงานร่วมกันในประเทศอื่นเพื่อรับความเห็นที่สองหรือการวิเคราะห์เพิ่มเติม
เครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงของเราและความเหมาะสมสำหรับ ISH
บริษัทของเรามีเครื่องสแกนสไลด์ฟลูออเรสเซนซ์คุณภาพสูงหลายประเภท รวมถึงเครื่องสแกนพยาธิวิทยาดิจิตอล GScan - 60-เครื่องสแกนสไลด์กล้องจุลทรรศน์, และเครื่องสแกนสไลด์ Brightfield EScan - 1200-
เครื่องสแกนพยาธิวิทยาแบบดิจิทัล GScan - 60 ได้รับการออกแบบมาเพื่อการถ่ายภาพเรืองแสงที่มีความละเอียดสูง โดยมีคุณลักษณะเครื่องตรวจจับที่มีความละเอียดอ่อนซึ่งสามารถจับสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ที่อ่อนได้อย่างแม่นยำ ซึ่งมักเกิดขึ้นในกรณีของการวิเคราะห์ FISH ซึ่งอาจมีโพรบฟลูออเรสเซนต์อยู่ที่ความเข้มข้นต่ำ นอกจากนี้ เครื่องสแกนยังมีขั้นตอนที่มีความแม่นยำสูงซึ่งช่วยให้วางตำแหน่งสไลด์ได้อย่างแม่นยำในระหว่างการสแกน ซึ่งช่วยลดความเสี่ยงที่จะเกิดภาพผิดปกติให้เหลือน้อยที่สุด
เครื่องสแกนสไลด์กล้องจุลทรรศน์เป็นเครื่องมืออเนกประสงค์ที่สามารถรองรับสไลด์ได้หลากหลายประเภท และเหมาะสำหรับทั้งการวิจัยและการใช้งานทางคลินิก มีตัวเลือกการถ่ายภาพที่ยืดหยุ่น ช่วยให้ผู้ใช้สามารถปรับพารามิเตอร์การสแกนตามความต้องการเฉพาะของการทดลอง ISH ตัวอย่างเช่น ผู้ใช้สามารถเลือกระดับการขยายและเวลาเปิดรับแสงที่แตกต่างกันเพื่อเพิ่มประสิทธิภาพการตรวจจับสัญญาณฟลูออเรสเซนต์
เครื่องสแกนสไลด์ Brightfield EScan - 1200 แม้ว่าจะออกแบบมาสำหรับการถ่ายภาพด้วยแสงจ้าเป็นหลัก แต่ก็สามารถใช้ร่วมกับการถ่ายภาพด้วยแสงเรืองแสงได้ในบางกรณี โดยให้ภาพไบรท์ฟิลด์คุณภาพสูงที่สามารถใช้เพื่อแสดงภาพสัณฐานวิทยาของเนื้อเยื่อโดยรวม ในขณะที่การถ่ายภาพเรืองแสงสามารถใช้เพื่อตรวจจับลำดับกรดนิวคลีอิกเฉพาะที่สนใจ
ข้อควรพิจารณาในการใช้เครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงในการวิเคราะห์ ISH
แม้ว่าเครื่องสแกนสไลด์ฟลูออเรสเซนซ์จะมีข้อดีหลายประการสำหรับการวิเคราะห์ ISH แต่ก็มีข้อควรพิจารณาบางประการที่นักวิจัยจำเป็นต้องคำนึงถึง
การเตรียมตัวอย่าง
การเตรียมตัวอย่างที่เหมาะสมเป็นสิ่งสำคัญสำหรับการวิเคราะห์ ISH ที่ประสบความสำเร็จโดยใช้เครื่องสแกนสไลด์ ตัวอย่างเนื้อเยื่อจำเป็นต้องได้รับการแก้ไขและดำเนินการอย่างถูกต้องเพื่อรักษาความสมบูรณ์ของกรดนิวคลีอิก และเพื่อให้แน่ใจว่าโพรบจะผสมพันธุ์ได้ดี การตรึงมากเกินไปหรือการซึมผ่านที่ไม่เหมาะสมอาจทำให้การเข้าถึงโพรบลดลงและสัญญาณฟลูออเรสเซนต์อ่อนลง นอกจากนี้ สไลด์ต้องสะอาดและไม่มีเศษผงเพื่อหลีกเลี่ยงการรบกวนกระบวนการสแกน
การเลือกโพรบฟลูออเรสเซนต์
การเลือกใช้โพรบฟลูออเรสเซนต์ก็มีความสำคัญเช่นกัน โพรบควรมีความจำเพาะสูงสำหรับลำดับกรดนิวคลีอิกเป้าหมาย และควรส่งสัญญาณฟลูออเรสเซนต์ที่แรงและเสถียร ฟลูออโรฟอร์ที่แตกต่างกันมีสเปกตรัมการกระตุ้นและการปล่อยก๊าซที่แตกต่างกัน และเครื่องสแกนสไลด์จะต้องเข้ากันได้กับฟลูออโรฟอร์ที่ใช้ในการทดลอง ISH ตัวอย่างเช่น หากนักวิจัยใช้โพรบที่มีป้ายกำกับว่าฟลูออโรฟอร์สีแดงฟาร์เรด เครื่องสแกนสไลด์ควรมีแหล่งกำเนิดแสงและตัวตรวจจับที่สามารถกระตุ้นและตรวจจับฟลูออเรสเซนต์สีแดงฟาร์เรดได้อย่างมีประสิทธิภาพ
การวิเคราะห์ภาพ
เมื่อสแกนสไลด์แล้ว รูปภาพดิจิทัลจะต้องได้รับการวิเคราะห์เพื่อดึงข้อมูลที่มีความหมายออกมา ซึ่งมักต้องใช้ซอฟต์แวร์วิเคราะห์ภาพเฉพาะทาง ซอฟต์แวร์ควรจะสามารถแบ่งส่วนสัญญาณฟลูออเรสเซนต์จากพื้นหลังได้อย่างแม่นยำ วัดปริมาณความเข้มของสัญญาณ และจัดให้มีการวิเคราะห์ทางสถิติหากจำเป็น เครื่องสแกนสไลด์บางรุ่นมาพร้อมกับซอฟต์แวร์วิเคราะห์รูปภาพในตัว ในขณะที่บางรุ่นอาจต้องใช้ซอฟต์แวร์บุคคลที่สาม
บทสรุป
โดยสรุป สามารถใช้เครื่องสแกนสไลด์ฟลูออเรสเซนซ์สำหรับการวิเคราะห์ไฮบริดไดเซชันในแหล่งกำเนิดได้อย่างมีประสิทธิภาพ โดยนำเสนอการถ่ายภาพที่มีปริมาณงานสูง คุณภาพของภาพที่สม่ำเสมอ และความสามารถในการจัดเก็บและวิเคราะห์ข้อมูลแบบดิจิทัล กลุ่มผลิตภัณฑ์เครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงของเรา รวมถึงเครื่องสแกนพยาธิวิทยาดิจิตอล GScan - 60-เครื่องสแกนสไลด์กล้องจุลทรรศน์, และเครื่องสแกนสไลด์ Brightfield EScan - 1200เหมาะอย่างยิ่งสำหรับการใช้งาน ISH
หากคุณมีส่วนร่วมในการวิเคราะห์ไฮบริดไดเซชันในแหล่งกำเนิด และกำลังมองหาเครื่องสแกนสไลด์เรืองแสงที่เชื่อถือได้ เราขอแนะนำให้คุณติดต่อเราเพื่อขอข้อมูลเพิ่มเติมและเพื่อหารือเกี่ยวกับข้อกำหนดเฉพาะของคุณ ทีมผู้เชี่ยวชาญของเราพร้อมที่จะช่วยเหลือคุณในการเลือกเครื่องสแกนที่เหมาะสมที่สุดสำหรับการวิจัยหรือความต้องการทางคลินิกของคุณ และให้การสนับสนุนตลอดกระบวนการจัดซื้อ
อ้างอิง
- สปีล, อีเจ, ฮอปแมน, เอเอช, และรามาเกอร์ส, เอฟซี (2001) โปรโตคอลไฮบริดไดเซชันในแหล่งกำเนิด สื่อวิทยาศาสตร์และธุรกิจสปริงเกอร์
- เลฟสกี้ เจเอ็ม และนักร้อง RH (2003) การเรืองแสงในแหล่งกำเนิดแบบผสม: อดีต ปัจจุบัน และอนาคต วารสารวิทยาศาสตร์เซลล์, 116(10), 2538 - 2547
- ทรากส์, บีเจ (2002) เซลล์พันธุศาสตร์ของมนุษย์: 46 โครโมโซม, 46 ปีและเพิ่มขึ้นเรื่อยๆ พันธุศาสตร์รีวิวธรรมชาติ, 3(11), 769 - 778
